鼠尾鉴定试剂盒使用说明 Mouse Genotyping Kit

产品简介

本试剂盒专用于小鼠基因型的快速鉴定。仅需 1-2mm 小鼠尾部组织或脚趾，短短 15 分钟即可获取足够量的 DNA 模板直接用于 PCR 反应，无需抽提与纯化。未提纯的 DNA 样品含有许多 PCR 抑制成分，对 PCR 酶的兼容性有很大要求。本试剂盒中配套的 DirectAmp PCR Mix 经过优化，对未提纯模板中的抑制成分有很强的耐受性，可兼容未提纯 DNA模板，实现一步法 PCR 鉴定。DirectAmp PCR Mix 中含有 loading dye，PCR 后可直接跑凝胶电泳，省时方便。

产品优势

• 更少的样品量：仅需1-2mm小鼠尾部组织或脚趾；
• 更快捷的操作：仅需15min极速完成样品处理，允许96孔板高通量操作；
• 更兼容的PCR体系：产品中的DirectAmp PCR Mix经独家优化，对未提纯模板中的抑制成分有很强的耐受性，DNA模板无需抽提纯化，且PCR产物可直接跑凝胶，实现一步法PCR鉴定。
• 更长的扩增片段：目的片段扩增长度可达3 k，区别于市面上的2k以内。

 试剂盒组成：

实验前准备

镊子，手术剪，PCR 管/PCR 8 联管/96 孔 PCR 板，单道移液器/多道移液器，PCR 扩增仪，恒温金属（水）浴，小型高速离心机

鼠尾裂解释放 DNA

1）散管操作

1 准备好镊子和手术剪，75%的乙醇喷洗消毒。

2 剪取 1-2 mm 鼠尾，用镊子夹到 PCR 管/ PCR 8 联管中，加 50 μL Tail Lysis，裂解液需没过鼠尾。

3 将 PCR 管放到 95℃金属浴中或者PCR仪中，孵育 15 min-30 min。

注意：若样品为脚趾，孵育时间建议设置为 30 min。

4 把上清液移至 8 联管或者 96 孔 PCR 板中存放，样品可直接进行 PCR 实验，若暂时不使用，可保存在-20 冰箱中（也可直接吸取上清加入到PCR体系中）。

2）96 孔板高通量操作

1 准备好镊子和手术剪，75%的乙醇喷洗消毒。

2 剪取 1-2 mm 鼠尾，用镊子夹到 96 孔 PCR 板，加 50μL Tail Lysis，裂解液需没过鼠尾。

3 将 96 孔 PCR 板放到 PCR 仪中，95℃，孵育 15 min-30 min。

注意：若样品为脚趾，孵育时间建议设置为 30 min。

4 把上清液移至新的 96 孔 PCR 板中存放，样品可直接进行 PCR 实验，若暂时不使用，可保存在-20冰箱中。

PCR 鉴定

将 DirectAmp PCR Mix从-20℃冰箱取出，放置在冰盒中融解，按照下表配制 PCR 体系：

表 1. 实验样品配制体系

PCR 反应程序如下表：

表 2. PCR 鉴定程序

PCR 产物可直接点样跑琼脂糖凝胶（不需加 Loading Buffer），或者送 Sanger 测序。

常见问题

① 鼠尾没有裂解完，是否会有影响？

裂解 15 min 后鼠尾还有未裂解完部分，但此时已裂解的样品释放出足够的基因组 DNA 可供后续实验了。若样品为脚趾这类带有较硬难消化的组织，可把时间延长至 30 min。

② PCR 产物少或没有目的条带？

a）裂解后可以转移上清弃沉淀，裂解液中的杂质抑制了 PCR 反应。

b）裂解液中的 DNA 含量太多，可通过稀释裂解液模板解决；或者DNA含量较少，可延长裂解时间，或者增加模板量。

c）引物设计问题。引物与模板不匹配，或者设计时没有注意引物的 GC 含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。

d）扩增序列 GC 含量偏高。在 PCR 体系中添加 GC Buffer 或者 DMSO 等变性剂，帮助打开模板链，降低 PCR 扩增难度。

③ 可以使用其他的 PCR 酶进行鉴定吗？

本试剂盒 Tail Lysis 处理后的样品为粗提核酸样品，便于进行微量细胞的基因组提取和高通量操作，但由于未经过纯化，不能兼容所有的 PCR 试剂，推荐配套的鉴定试剂 DirectAmp PCR Mix。

④ 可以扩增多大的片段？

由于粗提样本中含有抑制 PCR 反应的因子，会影响 PCR 酶的活性，建议扩增片段长度设计在 3k 以内。（如需扩增更大片段或者复杂序列请联系技术人员）