微谨生物是一家专业的微生物基因编辑公司,可根据客户的具体需求提供一对一的方案定制服务。可进行编辑的细菌、真菌种类覆盖当前热门研究领域,敲除、敲入、点突变均可实现。联系我们13241131665(微信同号)

微谨生物会根据您的细菌/真菌特性,选择最优的编辑系统:

1. CRISPR/Cas9基因编辑系统:创新性结合CRISPR/Cas9系统和Red/ET重组系统,利用CRISPR/Cas9系统的高效定点切割优势,以及Red/ET高效重组优势,极大提高了细菌和真菌的基因编辑的效率。而且还能实现无痕编辑,大大提高后续实验可靠性。

2. 位点特异性基因重组系统Cre-lox 系统来源于大肠杆菌P1 噬菌体,可以促使噬菌体DNA插入到细菌基因组中。Cre 重组酶可以识别长度为34 bp 具有方向性的loxP位点。同一DNA分子上同向的两个loxP 位点发生重组,可以删除两个loxP 位点之间的DNA片段;同一DNA 分子上反向的两个loxP 位点发生重组,可以使两个loxP 位点之间的DNA片段发生倒置。在细菌基因编辑中,Cre-lox 重组系统常用作删除选择标记基因、大片段基因的删除和倒置等。

3. 同源重组系统:在细菌中引入两端具有与受体基因组DNA同源片段的外源dsDNA 分子,借助于λ-Red 重组系统或RecE/T 重组系统,诱发同源片段中间的外源DNA 序列与基因组序列发生交换,可实现基于同源重组的基因编辑。

微生物基因编辑定制服务

微谨生物提供多种微生物的编辑服务,微生物类型包括多种常见细菌和真菌:

常见细菌 大肠杆菌 沙门氏菌
铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌
乳酸菌 酿酒酵母
肺炎克雷伯菌 假单胞菌
鲍曼不动杆菌 肠道厌氧菌
常见真菌 酵母 毕赤酵母
酿酒酵母 丝状真菌

*如果您研究的细菌/真菌不在上述清单中,请联系我们制定一对一定制方案。13241131665(微信同号)

服务类型

  • 无痕基因敲除:利用Red/ET重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统结合,实现高效定点切割,并消除外源质粒。
  • 无痕基因点突变:利用CRISPR/Cas9系统的高效定点切割优势,实现基因组定点突变。
  • 无痕基因敲入:利用Red/ET重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统结合,实现基因组定点敲入。

技术优势

  • 高效定点切割:利用CRISPR/Cas9系统的高效定点切割优势,极大提高了细菌基因编辑的效率。
  • 无痕编辑:可实现无痕敲除(不残留抗性或重组位点),同时消除外源质粒。
  • 操作简单:通过电转的方法将CRISPR载体导入细菌体内进行基因编辑,可实现敲除、点突变和敲入等操作。
  • 靶向性强:CRISPR技术具有靶向性强、脱靶率低等优势,可实现对特定基因的精准编辑。
  • 适用范围广:可实现多种微生物的编辑服务,包括细菌、真菌等。


基因编辑微生物定制流程

1. 根据客户需求、细菌/真菌类型和靶基因的情况进行基因编辑方案设计

2. 构建编辑载体

3. 制备感受态以及电转

4. 抗性筛选获得阳性克隆菌株

5. 对编辑后的菌落进行PCR鉴定和靶位点测序鉴定


基于Cas9系统的微生物基因组编辑

微谨生物致力于为客户提供品质最优的产品,客户的信赖是我们的最大动力!我们承诺所提供的服务均有品质保证,欢迎咨询!13241131665(微信同号)

微谨生物基因编辑微生物案例分享

CRISPR/Cas9用于乳酸克鲁维酵母基因组编辑——构建NHEJ修复途径缺失菌株


(1)sgRNA设计,选择切割效率和特异性高的gRNA。

(2)编辑载体构建:将上述gRNA插入通用载体的sgRNA表达盒中,通用载体携带Cas9表达框与sgRNA表达盒,同时将靶基因的上游和下游同源臂连接到通用载体。


图2. ku80基因敲除验证结果

(3)编辑载体转化与筛选:将编辑载体电转化感受态细胞,菌落PCR验证转化子,对阳性转化子PCR产物测序验证。

(4)突变菌株功能鉴定:比较NHEJ修复途径缺失菌株与野生型菌株敲除同一个基因的效率,结果显示敲除ku80基因后的菌株敲除效率从35%提高到了100%。证实在乳酸克鲁维酵母中敲除ku80基因能有效阻断NHEJ途径,激发细胞的同源重组系统,从而提高基因编辑效率。

图3. ku80基因敲除后基因编辑效率比较