单克隆鉴定试剂盒

本试剂盒是专门针对基因编辑细胞株构建过程中的单克隆鉴定环节所开发的产品，能在单克隆生长早期即开始鉴定，提前筛选到合格的单克隆，不仅可缩短实验周期，还减少了培养非阳性克隆的培养成本与人力。单克隆细胞基因组样品的制备只需 15-20 分钟，直接裂解细胞释放基因组，不需纯化即可直接进行下游的PCR实验，操作简便，还能进行 96 孔板高通量鉴定操作，同时鉴定上百个细胞样品。

• 使用简便：仅需3步即可完成基因组样品的制备；裂解产物无需纯化便可直接用于下游PCR实验；
• 高通量鉴定：利用96孔板同时鉴定上百个单克隆，可轻松实现单克隆的高通量鉴定；
• 更少的样品量：在单克隆早期生长阶段，取3000-5000个细胞，即可对其基因型进行鉴定，大大缩短实验周期，减少实验成本；
• 更兼容的PCR体系：产品中的DirectClone PCR Mix，对未提纯模板中的抑制成分有很强的耐受性，DNA模板无需抽提纯化，且PCR产物可直接跑凝胶，实现一步法PCR鉴定。

① PCR 8联管/96 孔PCR 板
② 单道移液器/多道移液器 PCR 扩增仪
③ 操作批量悬浮细胞需要准备台式离心机(配置酶标板转子)。

01 细胞处理
待96孔板的细胞长至可以传代后，对细胞进行传代操作，一半接种继续培养，另外一半细胞大约3000-5000个细胞，离心后小心吸走细胞上清，尽量将上清吸取干净。
*选做：加 PBS 洗涤细胞，3000rpm 常温离心 5-10 min，此步骤可减少样品中的杂质，但如果细胞量较少，可不做此步。

02 细胞裂解
① 每个细胞样品中加入50 ul MicroCell DNA Lysis BufferA，吹打混匀10-15 次。
②) 将上一步样品转移至96 孔PCR 板，盖上硅胶膜； 或者转移到8联管中，加盖密封。
③ PCR 仪设置好程序，95℃，15-30 min，样品上机。

03 终止裂解
从PCR 仪上取下裂解好的样品，加 50 ul MicroCell DNA Lysis Buffer B，吹打混匀。样品可保存在-20℃或直接用于做下游 PCR 反应。
备注：Buffer B可加可不加，加上之后可长期保存DNA样本；如果裂解后直接做PCR可不加Bufer B。

将 DirectClone PCR Mix从-20°C冰箱取出，放置在冰盒中融解，按照下 表配制PCR 体系：

PCR产物可直接点样跑琼脂糖凝胶(不需加 Loading Buffer)，或者送 Sanger 测序。

① 如果细胞量少于3x103个，MicroCell DNALysis Buffer还是按照上述说明的量来处理细胞吗?
如果细胞量少，可以尝试减少MicroCell DNA Lysis BuferA至 10 μL~50 uL，同时 MicroCell DNA Lysis Buffer B雲要等量减少。同时为了保证 PCR的产量，做PCR时，单克降细胞裂解产物的量可调整到5 uL。

② 能否处理 48 孔板,24 孔板,12 孔板或更多细胞量的样品?
上述样品均可用此试剂盒处理，只需按比例增加 MicroCell DNALysis BufferA的用量，同时 MicroCell DNA Lysis Buffer B需要等比例增加。