“明星”微生物,CRISPR基因敲除
微谨生物精选热门微生物,基因敲除限时特惠,速来get!CRISPR/Cas9基因编辑微生物技术,精准切割,不留痕迹,让你的实验数据美到冒泡!
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注:以上标准菌株的常规基因敲除可承诺失败不收取费用,非常规基因及非常规敲除方案不承诺,价格需要评估后定价。以上活动最终解释权归微谨生物所有。
- 适用范围广:自主研发体系,适用于多种菌株编辑,大大拓展菌株范围。
- 高效定点切割:CRISPR/Cas9极大提升细菌编辑的速度与准确性,缩短实验周期。
- 无痕编辑:避免抗性标记残留,保持菌株纯净。
- 转化效率高:针对不同菌株优化电转体系,提高编辑系统的转化效率和成功率。
- 靶向性强:对特定基因精准编辑,减少非预期影响。
- 多系统可选:CRISPR/Cas9基因编辑系统、位点特异性基因重组系统、同源重组系统等可供选择!
基于Cas9系统的微生物基因组编辑
CRISPR/Cas9用于乳酸克鲁维酵母基因组编辑——构建NHEJ修复途径缺失菌株
(1)sgRNA设计,选择切割效率和特异性高的gRNA。
(2)编辑载体构建:将上述gRNA插入通用载体的sgRNA表达盒中,通用载体携带Cas9表达框与sgRNA表达盒,同时将靶基因的上游和下游同源臂连接到通用载体。
图2. ku80基因敲除验证结果
(3)编辑载体转化与筛选:将编辑载体电转化感受态细胞,菌落PCR验证转化子,对阳性转化子PCR产物测序验证。
(4)突变菌株功能鉴定:比较NHEJ修复途径缺失菌株与野生型菌株敲除同一个基因的效率,结果显示敲除ku80基因后的菌株敲除效率从35%提高到了100%。证实在乳酸克鲁维酵母中敲除ku80基因能有效阻断NHEJ途径,激发细胞的同源重组系统,从而提高基因编辑效率。
图3. ku80基因敲除后基因编辑效率比较