| 传代方法 | 复苏步骤：①冻存管从液氮或-80℃中取出放入PE手套中，迅速没入37℃水浴锅，摇晃冻存管加速溶解，以1分钟内全部溶解为宜；②在超净台中将溶解好的细胞液加入到装有9ml 完全培养基的离心管内，1000-1200rpm/min离心3-5分钟，弃去上清液，用1-2mL完全培养基重悬细胞。③然后将细胞悬液加入到含有6-8mL完全培养基的T25瓶中，放入培养箱培养。 细胞传代：①将培养液（含悬浮细胞）吸至离心管中，1000RPM条件下离心5分钟，收集细胞；②用PBS轻轻润洗T25瓶两遍后，加入1-2mL胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA）；镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（可用吸管吸起些许胰酶轻轻吹打细胞层某处，肉眼可见细胞层脱落，即消化完成，否则继续消化），直接吸掉胰酶，加入5-6毫升完全培养基，轻轻吹打细胞层，把细胞层吹落，吹散。③将上述两步操作所得细胞混匀在一起后按1:2比例分到新的T25瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养。④注意培养基PH值变化和细胞密度，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%-90%时，重复传代操作或者冻存。 |
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